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ELISA與Western Blot實(shí)驗(yàn)的區(qū)別
一、基本原理與核心差異
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))?
基于抗原-抗體特異性結(jié)合，通過酶
標(biāo)記信號(hào)放大(如HRP催化顯色)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，通常使用96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板作為固相載體?。
適用于溶液樣本(如血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清)的定量分析，靈敏度高且可高通量操作?。
Western Blot(蛋白質(zhì)免疫印跡)?
需先通過SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì)，再轉(zhuǎn)印至固相膜(如PVDF膜)，通過抗體結(jié)合和化學(xué)發(fā)光/顯色檢測(cè)目標(biāo)蛋白?。
可提供蛋白質(zhì)分子量信息，適用于定性或半定量分析，尤其適合研究翻譯后修飾?。
二、操作流程對(duì)比
步驟? ?ELISA? ?Western Blot?
樣本處理? 直接檢測(cè)液體樣本，無需電泳 需提取蛋白并電泳分離?
檢測(cè)方式? 酶標(biāo)儀讀取吸光度(OD值) 化學(xué)發(fā)光/顯色成像系統(tǒng)?
耗時(shí)? 數(shù)小時(shí)(快速) 1-2天(復(fù)雜)?
三、應(yīng)用場(chǎng)景選擇
ELISA優(yōu)先?：
需高精度定量(如細(xì)胞因子濃度測(cè)定)?。
高通量篩選(如藥物開發(fā)中的抗體檢測(cè))?。
Western Blot優(yōu)先?：
需分析蛋白質(zhì)分子量或翻譯后修飾?。
驗(yàn)證蛋白質(zhì)表達(dá)水平(如基因敲除效果)?。
四、技術(shù)局限性
ELISA?：無法區(qū)分蛋白質(zhì)亞型或修飾，依賴抗體特異性?。
Western Blot?：定量誤差較大，操作復(fù)雜且通量低?。
五、總結(jié)
ELISA與Western Blot雖均基于免疫反應(yīng)，但ELISA以定量見長(zhǎng)，Western Blot以定性分析為優(yōu)，選擇時(shí)需結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)康?定量/定性)、樣本類型及設(shè)備條件綜合判斷?。
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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